خون می تواند رنگ طبیعی مدفوع را تغییر دهد به طوری که خونریزی در قسمت های بالای دستگاه گوارش باعث تیره شدن مدفوع میشود ودر هنگام خون ریزی در قسمت های پایین دستگاه گوارش و مقعد خون تازه و روشن در مدفوع دیده خواهد شد که این موارد به صورت ماکروسکوپی گزارش میشود اما گاهی بیمار خونریزی خفیف و مخفی دارد که باعث تغییر رنگ مدفوع نمیشود ولی تست OB آن مثبت است بنابراین این تست اهمیت زیادی در تشخیص خونریزی های فوقانی و تحتانی دستگاه گوارش دارد. روش آزمایش OB به گونه ای انتخاب میشود که بالاتر از ۵-۱۰ میلی لیتر خونریزی را کشف کند.تست های زیادی از قبیل:گایاک, میر, بنزیدین, الکل پیرامیدون و ارتوتولوئیدن و …. برای جستجوی خون مخفی در مدفوع وجود دارد که اساس همه ی آنها بر تعیین فعالیت پراکسیداز موجود در گلبول قرمز می باشد. در این مطلب یک آزمایش شیمیایی که بسیار ساده و رایج در آزمایشگاه ها میباشد ارائه میشود:

OB به روش گتلر

تهیه محلول گتلر:

۲۰ گرم سود را در ۱۰۰ سی سی آب مقطر حل کرده سپس ۱ گرم فنل الفتالئین را به آن اضافه کرده و حل می کنیم.سپس ۱۰ گرم از پودر روی را که به عنوان کاتالیزور این واکنش است به آن می افزاییم و حرارت می دهیم تا رنگ محلول با بازی شدن محیط از ارغوانی به حالت بی رنگ تغییر پیدا کند. محلول تهیه شده را صاف کرده و در یخچال نگه داری می کنیم.

روش کار:

مقداری از مدفوع را در ۲ سی سی آب مقطر حل کرده و حرارت میدهیم تا گلبول های قرمز لیز شوند. ۵ قطره محلول گتلر را به لوله می افزاییم و بعد ۲ قطره محلول H2O2 غلیظ را به آن اضافه میکنیم. در صورت مثبت بودن جواب تست تغییر رنگ از صورتی تا قرمز پررنگ ایجاد میشود و در صورت منفی بودن تغییر رنگی وجود ندارد.

****شدت رنگ حاصله بستگی به شدت خونریزی و شدت واکنش آنزیمی دارد.

*****تستOB در موارد خونریزی قسمت های تحتانی دستگاه گوارش بهتر از خونریزی قسمت های فوقانی جواب می دهد زیرا پراکسیداز طی عبور از دستگاه گوارش تحلیل میرود.

*****به زمان آزمایش توجه کنید مثبت شدن پس از پایان زمان پیشنهادی برای محلول گتلر و آب اکسیژنه مثبت کاذب بوده و ارزش ندارد.در این روش شیمیایی آب اکسیزنه مصرفی باید ۲ % تهیه و ۳ روز یک بار عوض شود.

موارد منفی کاذب:

۱-وجود ویتامین C به مقدار زیاد در موادغذایی و مدفوع

۲-وجود آنتی اکسیدانت در مدفوع

موارد مثبت کاذب:

۱-میوگلوبین و هموگلوبین گوشت و ماهی و …..

۲-داروها مانند :آسپیرین و اهن و ….

۳-باکتری ها

۴-سبزیجات و میوه ها

برای رفع مشکل مثبت کاذب می توان کارهای زیر را انجام داد:

۱-خراب کردن پراکسیداز باکتری و سبزیجات با حرارت دادن , سوسپانسیون مدفوع و تکرار تست توصیه میشود زیرا ممکن است با حرارت زیاد هموگلوبین تخریب شود.

۲-رژیم غذایی بدون گوشت و تکرار آزمایش پس از ۳روز